碧云天的Human Angiopoietin-2 ELISA Kit (Human Angiopoietin-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人促血管生成素2酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清或细胞培养上清液中的Angiopoietin-2的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为92pg/ml，与人的Angiopoietin-1、FGF basic、Tie-1、Tie-2、小鼠的Angiopoietin-3、Tie-2均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

人促血管生成素2 (Angiopoietin-2, Ang-2)是一种分子量为70kDa的分泌型糖蛋白，在血管生成，炎症反应中都具有重要作用。Angiopoietin-2包含N端的卷曲螺旋结构域和C端的纤维蛋白原样结构域，二者分别对蛋白多聚化和受体结合过程进行调节。成熟的人Angiopoietin-2与小鼠和大鼠Angiopoietin-2具有86%的序列相似性。Ang-2主要表达在血管内皮细胞、平滑肌细胞、肺表皮细胞、分化的肌小管和神经元祖细胞中。细胞应激会导致其表达上调，同时败血症和急性肺损伤也会导致Ang-2浓度升高。

Ang-2与Ang-1都能够作用于酪氨酸激酶受体Tie-2。Ang-2在激活Tie-2的同时，也能在一定程度上抑制Ang-1对受体的激活作用。Ang-2能够促进内皮细胞存活、增殖和迁移，同时也能促进血管形成。Ang-2能够减少血管壁上周皮细胞的数量，增加血管通透性。在淋巴管发育过程中，Ang-2具有重要作用，产后淋巴管和血管的重构过程同样需要Ang-2的参与。在肿瘤环境下，来自于肿瘤细胞的VEGF会诱导Ang-2的生成，增加的VEGF会导致肿瘤组织血管生成和肿瘤生长。Ang-2还能够调节细胞粘附，促进肿瘤细胞迁移。另外，Ang-2还能够促进成肌细胞、调节性T细胞核神经元细胞分化。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Angiopoietin-2的浓度，其原理见图1。人Angiopoietin-2特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Angiopoietin-2会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Angiopoietin-2抗体后，生物素化抗人Angiopoietin-2抗体与人Angiopoietin-2结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Angiopoietin-2浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。