碧云天的Human C3aELISA Kit(Human C3aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人补体成分C3a酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的C3a的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为42pg/ml，与人的C5a等没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

补体系统(complement system)是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面，是一种具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。补体C3a是补体固有分子C3的活化裂解产物。在C3转化酶的作用下，C3被激活裂解成C3a和C3b两个具有生物学活性的片段。C3b主要参与补体调理作用。C3a是一个分子量约为65-95kDa、带正电荷的强碱性多肽，它由86个氨基酸组成，具有趋化和激活白细胞，促进白细胞脱颗粒、释放组胺等炎症介质的功能。C3a参与补体系统三个激活途径，包括经典途径、旁路途径和凝集素途径。C3a、C4a、C5a这三种补体激活时产生的活性片段统称为过敏毒素(anaphylatoxin,AT)，它们作为配体能与炎症细胞表面相应受体结合，起到启动、调节炎症反应的作用。

C3a参与先天性免疫和后天获得性免疫过程。在过敏引起的支气管炎性反中，C3a活化肥大细胞和中性粒细胞，触发肥大细胞脱颗粒反应。C3a能增强巨噬细胞及其它细胞对脂多糖引起的前列腺素、细胞因子及趋化因子等分泌的增加。此外，C3a能增强Th2型炎性反应，刺激平滑肌细胞收缩和白细胞的趋化性。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人C3a的浓度，其原理见图1。人C3a特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人C3a会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人C3a抗体后，生物素化抗人C3a抗体与人C3a结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人C3a浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。