碧云天的Human CortisolELISA Kit(Human CortisolEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人皮质醇酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、唾液及细胞培养上清液中的皮质醇的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为78pg/ml，与11-脱氧皮质醇的交叉反应性为0.9%，与氢化泼尼松的交叉反应性为5.6%，与皮质酮的交叉反应性为0.6%，与脱氧皮质酮、孕酮、17-己酸羟孕酮、睾酮、雌三醇、达那唑等的交叉反应性小于0.1%板内、板间变异系数均小于10%。

皮质醇(Cortisol)，也称氢化可的松(Hydrocortisone)或化合物F(Compound F)，是从肾上腺皮质中提取的对糖类代谢具有最强作用的肾上腺皮质激素，属于糖皮质激素的一种。皮质醇有多种作用，但最为人所熟知的就是它对新陈代谢和免疫系统功能的影响。它是胆固醇的代谢物和其它类固醇激素激素如盐皮质激素、雌激素、雄激素和孕激素的前体。皮质醇水平由下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPAaxis)控制。垂体前叶释放的促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone, ACTH)调控肾上腺皮质分泌皮质醇。ACTH的分泌受到促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)和精氨酸加压素(arginine vasopressin)等多肽的调控。而皮质醇对CRH的释放具有抑制作用。正常的皮质醇代谢遵循一种生理节奏，是一个周期为24小时的循环，一般皮质醇水平最高点在早晨约6-8点，最低点在凌晨约0-2点。

大约由90%的皮质醇与结合蛋白相结合，主要是皮质类固醇结合球蛋白(corticosteroid-binding globulin, CBG)，但是皮质醇一般在游离的条件下发挥生理效应，也有一些证据表明CBG结合形式也可能作为一种生物介质。游离皮质醇穿过细胞膜进入胞浆，与广泛表达的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)结合。虽然目前只有一个GR基因被鉴定出来，但至少有两个选择性剪接的亚型(α以及β)存在并可能具有不同的表达模式和活动。一般认为，激素/受体复合物作为二聚体进入细胞核，在那里通过结合糖皮质激素反应元件(glucocorticoid response elements, GRE)调控转录。除了GR外，皮质醇与盐皮质激素受体(mineralcorticoidreceptor, MR)具有一定的亲和力，MR是醛固酮(aldosterone)的典型受体。

本试剂盒采用竞争法ELISA(Competitive ELISA)检测样品中Cortisol的浓度，其原理见图1。高特异性识别Cortisol的抗体已预包被于酶标板上，同时加入样品和辣根过氧化物酶标记Cortisol，样品中的Cortisol与辣根过氧化物酶标记Cortisol竞争性结合酶标板中包被的抗体。随后洗去游离的Cortisol与游离的辣根过氧化物酶标记Cortisol。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的TMB氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。如果样本中Cortisol含量越多，则与抗体结合的辣根过氧化物酶标记Cortisol就越少，颜色越浅，即颜色与样品中的浓度成反比。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。Cortisol浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中Cortisol浓度。

图1.竞争法ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

唾液中含有皮质醇，所以建议实验时佩戴口罩和手套，以免样品被污染。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。