碧云天的Human Clusterin ELISA Kit (Human Clusterin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人聚集素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Clusterin的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为59pg/ml，与人的CLUL-1、Leptin、TGF-β RI/Fc Chimera、TGF-β RII及小鼠和大鼠的Clusterin均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

聚集素(Clusterin)，又称载脂蛋白J (Apolipoprotein J)、SGP-2、TRPM-2或SP-40，是一种多功能性分泌蛋白。因其能够诱导细胞聚集所以被称为聚集素。Clusterin能够与多种分子结合，并且还能作为胞外错误折叠蛋白的分子伴侣。其同样参与对细胞的增殖、凋亡和癌变过程的调控。Clusterin在多种组织中都有表达，包括成熟的睾丸、卵巢、肾上腺、肝脏、心脏、大脑和胚胎发育过程时的上皮组织中。人Clusterin以前体蛋白的形式合成，包括两个螺旋卷曲域、两个核定位信号区域(NLS)和一个肝素结合域。经过细胞内剪切后，信号肽被切除，得到分子量相当的α链和β链，二者通过二硫键连接形成分子量为80kDa的异质二聚体被分泌至胞外。成熟的人Clusterin与小鼠Clusterin和大鼠Clusterin具有77%的序列相似性。

体内高浓度的Clusterin主要作为高密度脂蛋白的组成之一，通过与LRP-2/Megalin相互作用从而被细胞内化并分解。Clusterin能够与未被氧化修饰的LDL结合并抵消，因此能够减少LDL对动脉粥样硬化患者的损害。Clusterin具有的分子伴侣的功能还可以帮助减少β-淀粉样蛋白的累积，减缓阿尔茨海默症患者淀粉样蛋白斑的形成。在阿尔茨海默症患者、帕金森患者和多发性硬化患者的脑脊液以及肾损伤患者或膀胱癌患者尿液中，Clusterin浓度会出现显著升高。Clusterin循环水平的升高会通过抑制肿瘤细胞凋亡和促进EMT过程增强肿瘤侵袭性。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Clusterin的浓度，其原理见图1。人Clusterin特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Clusterin会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Clusterin抗体后，生物素化抗人Clusterin抗体与人Clusterin结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Clusterin浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。