碧云天的Human Dtk/Tyro3/SKY ELISA Kit (Human Dtk/Tyro3/SKY Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人受体酪氨酸激酶酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Dtk/Tyro3/SKY的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为64pg/ml，与人的Axl/Fc Chimera，mer/Fc Chimera及小鼠的Dtk/Tyro3/SKY/Fc Chimera没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTKs)为一类细胞表面跨膜蛋白，在介导细胞外信号向胞内传导过程中及重要作用。目前已发现约60种RTKs，按照受体与配体特征将其分为20个亚家族。Dtk，也称Tyro3和SKY，是AXL酪氨酸受体激酶的三个组成成分中的一个，另外两个成分是mer和AXL，它们具有共同的配体：Gas6和Protein S。Dtk分子由胞外区、胞内区和跨膜区三部分组成，为单次跨膜蛋白，其特点是胞外区由两个免疫球蛋白样结构域和两个纤连蛋白III型结构域构成，这种特点也是神经细胞黏附分子和酪氨酸激酶的特点之一。Dtk分子在人和动物的多种组织中广泛表达，在调节细胞的增殖和分化的过程中起重要作用。Dtk通过与依赖维生素K的Gas6基因的蛋白产物结合而与抗凝血作用的Protein S作用，从而引起下游信号的激活，促进细胞增殖，生长，防止调亡。胚胎发育时期，Dtk表达广泛，对成人来说，Dtk则主要在大脑的部分区域集中表达。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Dtk/Tyro3/SKY的浓度，其原理见图1。人Dtk/Tyro3/SKY特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Dtk/Tyro3/SKY会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Dtk/Tyro3/SKY抗体后，生物素化抗人Dtk/Tyro3/SKY抗体与人Dtk/Tyro3/SKY结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Dtk/Tyro3/SKY浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。