碧云天的Mouse EPO ELISA Kit (Mouse Erythropoietin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠促红细胞生成素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的EPO的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为58pg/ml，与小鼠TPO没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一种由肾脏产生的糖蛋白，参与调节哺乳类动物中红细胞生成。EPO的产生受到氧利用率变化的调节，在缺氧条件下，EPO水平会有所上升，从而导致红细胞数量增加。小鼠EPO基因编码192个氨基酸残基前体，包含26个氨基酸信号肽和166个氨基酸的成熟蛋白，其中有三个潜在的N-糖基化位点，小鼠EPO缺乏在人类EPO中发现的O-糖基化位点。糖基化对稳定EPO的体内活性具有重要作用[1]，若缺乏糖链，EPO在体内会被迅速水解而失活，但体外受体结合不需要糖链。根据细胞来源的不同产生不同亚型的EPO，不同亚型的EPO的糖类组成和唾液酸含量不同。成熟的小鼠EPO与成熟的大鼠、人和猫科动物EPO序列分别有94%、80%和82%的同源性。EPO通过两个EPO受体(EPO receptor, EPO R)亚单位组成的高亲和力的同源二聚体EPO R结合并发出信号。EPO R亚单位属于I型细胞因子受体超家族的I型跨膜糖蛋白，EPO与EPO R同源二聚体的结合导致非受体型酪氨酸蛋白激酶JAK2的构象变化、磷酸化和激活，从而使下游信号激活[2]。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠EPO的浓度，其原理见图1。小鼠EPO特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠EPO会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠EPO抗体后，生物素化抗小鼠EPO抗体与小鼠EPO结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠EPO浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。