碧云天研发生产的Mouse EGF ELISA Kit (Mouse Epidermal Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠表皮生长因子定量分析酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的EGF浓度的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为3.2pg/ml，与小鼠的Amphiregulin、Epiregulin、Epigen、MFG-E8及人的EGF、HB-EGF等无交叉反应性。EGF板内、板间变异系数均小于10%。

表皮生长因子(Epidermal growth factor, EGF)是一种能够诱导细胞增殖、分化和存活的生长因子，是EGF家族的创始成员，该家族还包括TGF-α、双调蛋白(Amphiregulin, AR)、β细胞素(Betacellulin, BTC)、表皮素(Epiregulin, EPR)、肝素结合EGF样生长因子(Heparin-binding EGF-like growth factor, HB-EGF)、表观素(Epigen)和神经调节蛋白(Neuregulins, NRG)-1到-6 [1]。EGF家族成员均含有一个特征性的EGF样结构域(EGF-like domain)，它包含三个分子内二硫键，由六个相似间隔的保守半胱氨酸残基形成[2]。这些二硫键对于正确的蛋白质构象和受体结合是必不可少的。所有EGF家族成员都被合成为I型跨膜前体蛋白，在细胞外区域可能包含几个EGF样结构域。成熟后通过调控蛋白水解从细胞表面释放出来[1]。全长EGF蛋白含1207个氨基酸，包含9个EGF结构域和9个LDLR B类重复序列。然而，成熟的EGF蛋白只有53个氨基酸，通过蛋白水解切割跨膜区附近的EGF结构域产生[3]。小鼠EGF与人EGF，大鼠EGF和猪EGF分别有70%，73%和74%的同源性。

EGF存在于各种体液中，包括血液、尿液、唾液、精液、胰液、脑脊液和羊水[4]。EGF受体(Epithelial growth factor receptor, EGFR)是ErbB受体家族成员之一。ErbB受体包括四种酪氨酸激酶(Tyrosine kinase, TK)，分别为EGFR/ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4，介导了EGF家族成员的各种反应[5]。EGF结合诱导EGFR二聚化，从而激活蛋白酪氨酸激酶信号通路。这些受体经历配体诱导的同源或异源二聚化的复杂模式，以转导EGF家族信号[6,7]。EGF结合ErbB1并诱导含有ErbB2的同源二聚体或异源二聚体的形成。二聚化导致受体在特定酪氨酸残基处自磷酸化，从而为各种信号分子创建对接位点[5,8]。EGF参与上皮发育、血管生成、抑制胃酸分泌、成纤维细胞增殖和培养中表皮细胞的集落形成。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠EGF的浓度，其原理见图1。小鼠EGF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠EGF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠EGF抗体后，生物素化抗小鼠EGF抗体与小鼠EGF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠EGF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。