碧云天生产的Mouse FGF-basic ELISA Kit (Mouse Fibroblast Growth Factor basic Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠碱性成纤维细胞生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的FGF-basic的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为44pg/ml，与小鼠FGF-acidic、FGF R2α (111b)/Fc Chimera、FGF R2β(111b)/Fc Chimera、FGF R3 (111b)/Fc Chimera没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。

碱性成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor, FGF-basic)，又称成纤维细胞因子2 (Fibroblast Growth Factor, FGF-2)或肝素结合生长因子(Heparin-Binding Growth Factor, HBGF-2)，是目前FGF家族中研究较为广泛的一种有丝分裂蛋白。FGF家族成员具有35-60%的氨基酸同源性，但只有酸性/碱性成纤维细胞生长因子不具有信号肽，具有多种分泌形式。细胞质和细胞核中都存在分子量为18kDa的FGF-basic亚型，FGF-basic同时也能以该形式被分泌至细胞外。不同的转录起始位点会产生分子量在21-23kDa之间的不同亚型，但这些亚型仅存在于细胞核内。不同的FGF亚型能够调控不同基因的表达。FGF-basic表达广泛，其过表达会影响骨发育和矿化过程。

FGF共有4种酪氨酸激酶受体(FGF R)，FGF-basic主要与FGF R1c和2c结合，FGF还有多种结合伴侣，参与调节FGF-basic活性。这些结合伴侣包括肝素、整合素αvβ3、游离FGF R1、FGF结合蛋白、游离神经节苷脂、血小板反应蛋白、穿透素3、纤维蛋白原、α2巨球蛋白、PDGF和血小板因子4等。FGF-basic与硫酸乙酰肝素糖蛋白(Heparan Sulfate Proteoglycan, HSPG)的结合能够帮助FGF-basic与FGF R结合，并且对FGF R的二聚化和激活至关重要。FGF-basic主要参与调节血管生成、伤口愈合、组织修复、学习和记忆、胚胎当中心、脑及骨的发育和分化等过程。炎性条件下，FGF-basic表达增加，另外当机体出现肿瘤时，FGF-basic表达也会出现升高，这可能是由于肿瘤组织处血管较为密集。

FGF-basic的功能通过三个信号通路进行调控，第一个是有丝分裂原蛋白活性酶途径(Mitogen-Actived Protein Kinase, MAPK)，第二个是磷酯酰3肌醇激酶途径，第三个是蛋白激酶C途径(Protein Kinase C, PKC)。FGF-basic在多种细胞表面表达，包括成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞及神经细胞等。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠FGF-basic的浓度，其原理见图1。小鼠FGF-basic特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠FGF-basic会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠FGF-basic抗体后，生物素化抗小鼠FGF-basic抗体与小鼠FGF-basic结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠FGF-basic浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。