碧云天的Human/Mouse/Rat HMGB1 ELISA Kit (Human/Mouse/Rat HMGB1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠高迁移率族蛋白1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人/小鼠/大鼠血清或血浆中的HMGB1的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为0.8ng/ml，与人的HMGB-2由12.7%的交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

人高迁移率族蛋白1(HMGB1)是一种分布广泛的高度保守的非组蛋白的核DNA结合蛋白，分子量为30kDa。高迁移率族蛋白(high mobility group, HMG)因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移率快而得名。HMG包括3个家族：HMGA、HMGB、HMGN，而HMGB家族有三个成员：分别为HMGB1、HMGB2、HMGB3。HMGB1高度保守，人和啮齿动物的氨基酸序列同源性高达95%以上。人HMGB1含219个氨基酸，N端富含带正电荷的赖氨酸，高度保守C端富含带负电荷的天门冬氨酸、谷氨酸。HMGB1分布广泛，可存在于细胞核、细胞浆和细胞外。胞核HMGB1主要和DNA结合起“DNA伴侣”的作用。它能广泛与特定结构的染色质DNA结合而调节细胞复制转录、DNA修复等。膜相关HMGB1通过与晚期糖基化终末产物受体(Receptor for Advanced Glycation End-Products, RAGE)高亲和力配体结合，参与神经元的生长、发育、轴突的外向生长、肿瘤的生长和转移、纤溶酶原的活化等。细胞外HMGB1作为晚期炎症介质参与各种急性炎症反应。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人/小鼠/大鼠HMGB1的浓度，其原理见图1。HMGB1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的HMGB1会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记抗HMGB1抗体后，辣根过氧化物酶标记抗HMGB1抗体与HMGB1结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。HMGB1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。