碧云天的Human IGFBP4 (C-terminal Fragment) ELISA Kit (Human IGFBP4 (C-terminal Fragment) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人胰岛素样生长因子结合蛋白4 C端片段酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆等样品中的IGFBP4 C端片段的ELISA试剂盒。IGFBP4的N端片段和C端片段已被发现是心血管疾病的新标志物。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为1.25ng/ml，板内、板间变异系数均小于10%。

胰岛素样生长因子结合蛋白4 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 4, IGFBP4)是IGFBP家族成员之一，该家族中至少包括6种高亲和力的IGF结合蛋白(Insulin-like Growth Factor Binding Protein, IGFBP)和4种低亲和力的IGFBP相关蛋白(IGFBP-rP)。所有IGFBP家族成员蛋白都是富含半胱氨酸的蛋白质，具有保守的半胱氨酸残基，主要聚集在蛋白的氨基端和羧基端。

IGFBPs参与调节IGF蛋白的生物学活性，其中的一些IGFBPs同时还具有其内在的生物活性。IGFBP的翻译后修饰方式主要包括糖基化、磷酸化和水解作用，这些修饰会影响其与IGF的亲和力大小。ALS (Acid Labile Subunit)是一种来源于肝脏的蛋白质，其主要存在于某些IGFBP和IGF组成的三元复合物中，ALS能够增加IGF/IGFBP复合物在血液循环中的半衰期。另外，IGFBP-4与IGF复合物能够被一种金属蛋白酶PAPP-A裂解，并且其裂解位点是高度特异性的。IGFBP-4经PAPP-A在Met135-Lys136位点酶切后会形成N端(14.6kDa，简称IGFBP4-NT)和C端(11.3kDa，简称IGFBP4-CT)两个片段，并且从IGF/IGFBP复合物中释放出来。IGFBP4-NT和IGFBP4-CT都是PAPP-A介导的IGFBP-4的水解产物。有研究表明，IGFBP-4的N和C片段可为ST段抬高型心肌梗死病人心血管事件提供预测价值，是心肌缺血病人主要不良心血管事件(Major adverse cardiovascular events, MACEs)短期评价的新型标志物。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IGFBP4-CT的浓度，其原理见图1。人IGFBP4-CT特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IGFBP4-CT会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记的抗人IGFBP4-CT抗体后，辣根过氧化物酶标记抗人IGFBP4-CT抗体与人IGFBP4-CT结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IGFBP4-CT浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人IGFBP4-CT浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。