碧云天的Human IL-18 ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素18酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、或细胞培养上清液中的IL-18的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为15.8pg/ml，与人IFN-γ、IL-18 BPa、IL-18 Rα、小鼠IL-18、大鼠IL-18等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

白细胞介素18 (Interleukin-18, IL-18)，又称IL-1F4，是一种属于IL-1家族的促炎性细胞因子，在不同环境中会表现出不同的免疫效应。IL-18主要以分子量为24kDa的前体蛋白形式表达，产生IL-18的细胞主要有内皮细胞、表皮细胞、角质细胞、γδT细胞和吞噬细胞。前体IL-18在细胞内通过Caspase-1调节的蛋白水解作用被激活，随后分泌出分子量为17kDa的成熟IL-18。坏死细胞也能分泌出前体IL-18，在细胞外经由多种蛋白酶处理后得到成熟的IL-18分子。IL-18的激活主要发生在感染或组织损伤时，并且会促进慢性炎症的病理损伤。

IL-18有两种受体，IL-18 Rα和IL-18 Rβ。IL-18首先与IL-18 Rα结合，随后招募IL-18 Rβ形成信号传递受体复合物。当IL-18与IL-18结合蛋白结合时，会表现出相反的生物学活性。当IL-12或IL-15同时存在时，IL-18能够促进IFN-γ的产生，诱导CD8+T细胞及自然杀伤细胞的细胞溶解活性，从而增强抗病毒免疫应答。然而在IL-12或IL-15不存在时，IL-18则会促进Th2型细胞因子IL-4和IL-13的产生。当与IL-1β或IL-23共存时，IL-18会诱导非抗原依赖性的IL-17的产生。同时IL-18还能促进骨髓来源树突状细胞的成熟，诱导中性粒细胞呼吸爆发。在肿瘤中，IL-18具有多种生物学活性，包括增强抗肿瘤免疫反应、抑制或促进新生血管生成以及促进肿瘤细胞转移。成熟的人IL-18与小鼠和大鼠IL-18具有63%的氨基酸活性。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-18的浓度，其原理见图1。人IL-18特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-18会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-18抗体后，生物素化抗人IL-18抗体与人IL-18结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-18浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人IL-18浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28ºC。温度低于25ºC会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。