碧云天的Human IL-33 ELISA Kit (Human Interleukin-33 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素33酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-33的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为28pg/ml，与人的pro-IL-33, IL-1α，IL-1β，IL-18及小鼠IL-33没有交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

白细胞介素-33 (Interleukin-33, IL-33)，是一种分子量为30kDa的促炎性蛋白。IL-33主要表达在平滑肌细胞和气道上皮细胞中，当细胞受到炎性刺激时，IL-33的表达会出现上调。小鼠IL-33首先编码合成具有266个氨基酸的前体分子，其N端具有细胞核定位信号区域和helix-turn-helix结构，C端在结构上与IL-1家族具有一定的相似性。全长IL-33能够与核染色质相互作用，并发挥转录阻遏蛋白的作用。利用Caspase-1样蛋白酶对全长IL-33分子进行酶切，会得到分子量为18kDa的分泌型成熟IL-33分子。成熟的人IL-33与小鼠和大鼠IL-33分别具有57%和59%的氨基酸同源性。

成熟的IL-33能够与跨膜受体ST2L/IL-1 R4结合，在IL-1 R3的协助下，完成IL-33依赖的NF-κB激活。对受体ST2L的选择性剪切会得到游离的诱骗受体ST2，ST2与IL-33的结合会封闭ST2L信号通路，抑制IL-33对免疫及心脏方面的作用效果。在哮喘和心力衰竭的患者中，ST2水平会显著升高。

分泌型IL-33分子能够促进Th2型免疫应答，导致嗜酸性粒细胞增多症和过敏反应。在Th2细胞中，IL-33能够上调IL-4、IL-5、IL-13以及ST2L的表达。在肥大细胞中，IL-33能够增强部分细胞因子和趋化因子的产生，但是并不会引发细胞脱粒。IL-33/ST2L系统对于心脏具有一定的积极作用，IL-33能够减轻由血管紧张素II或苯肾上腺素造成的心肌细胞肥大，机械压力会诱导心脏成纤维细胞和心肌细胞各自产生IL-33和ST2。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-33的浓度，其原理见图1。人IL-33特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-33会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-33抗体后，生物素化抗人IL-33抗体与人IL-33结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-33浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。