碧云天的Human LIFELISA Kit(Human LIFEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人白血病抑制因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的LIF的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为232pg/ml，与人的HIC5、LIM1无交叉反应性，与小鼠的LIF有33%交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)是细胞因子IL-6家族的成员。它是一种分子量为38-67kDa的多肽，最初被鉴定为小鼠M1髓系白血病细胞系的增殖抑制剂和分化诱导剂。成熟LIF分子长度为180个氨基酸残基，具有多个潜在的N-键和O-键糖基化位点，加上6个保守的半胱氨酸，形成3个分子内二硫键。成熟小鼠LIF与人LIF在氨基酸序列上有78%的同源性，表明LIF具有生物学的高度保守性。

LIF与LIF受体(LIF receptor, LIF R)相结合，LIFR是造血素受体超家族的一员。当单独表达时，LIFR以低亲和力结合LIF。当与gp130(细胞因子 IL-6 家族的受体共有的信号转导亚基)同时表达时，LIF、LIF R和gp130之间形成高亲和力的复合物，并通过JAK/STAT、PI3K和MAPK信号通路触发下游信号事件。

已知表达LIF的细胞包括活化的T细胞、单核细胞、星型胶质细胞(astrocytes)、成骨细胞(osteoblasts)、角质细胞(keratinocytes)、再生骨骼肌(regenerating skeletal muscle)、肥大细胞和成纤维细胞。在功能上，LIF参与了许多过程，包括干细胞维持、生殖、发育、造血、骨代谢、骨骼肌再生和炎症。研究还表明LIF在缺血-再灌注期间保护心肌细胞，并通过保护神经元细胞免受活性氧(reactive oxygen species, ROS)损伤，维持大量神经元干细胞来提高缺血中风后的修复能力。LIF可在多种体液中被检测到，血清中LIF浓度升高与血液系统恶性肿瘤的存在相关，而支气管肺泡灌洗液中LIF浓度升高与炎症标志物的增加相关，类风湿性关节炎患者外周血白细胞计数与LIF浓度升高相关。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人LIF的浓度，其原理见图1。人LIF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人LIF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人LIF抗体后，生物素化抗人LIF抗体与人LIF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人LIF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。