碧云天的Rat Leptin ELISA Kit (Rat Leptin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠瘦素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的Leptin的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为74pg/ml，与大鼠的βIG-H3及人的Leptin均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

瘦素的高亲和受体OB-R与糖蛋白130和粒细胞集落刺激因子受体具有一定的同源性，根据胞外域长度的不同分为OB-RL和OB-RS。OB-RL具有完整的胞外域，具有信号传导的能力；OB-RS胞外域较短，只能与瘦素结合，但不能传递信号。OB-RL主要表达在下丘脑，被认为是体重调节的重要分子；OB-RS则在肺、肾和造血细胞等多处都有表达。在小鼠、大鼠和人血浆中都检测到了较高浓度的瘦素，在进食或受到胰岛素、胰高血糖素、细胞因子刺激后的机体应答中，瘦素被认为发挥了重要的作用。血浆中，瘦素主要以与瘦素结合蛋白结合的形式存在。

瘦素受体与瘦素结合后通过招募JAK2使瘦素受体上的三个关键酪氨酸位点发生磷酸化，磷酸化的Tyr位点能够招募STAT3并使之磷酸化激活，随后发生二聚化进入细胞核发挥功能，启动SOCS3和NpY等靶基因的表达；另外，SOCS3蛋白又能抑制激活的JAK2-STAT3通路，从而实现负反馈调节。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠Leptin的浓度，其原理见图1。大鼠Leptin特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠Leptin会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠Leptin抗体后，生物素化抗大鼠Leptin抗体与大鼠Leptin结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠Leptin浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。