碧云天的HumanMyeloperoxidaseELISA Kit (HumanMyeloperoxidaseEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人髓过氧化物酶酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆中的Myeloperoxidase的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为48pg/ml，与人的COX1、Glutathione Peroxidase、HMW Kininogen、Integrin β2等没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)是一种重要的含血红素的过氧化物酶(heme-containing peroxidase)，属于过氧化物酶XPO亚家族。MPO存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜天青颗粒中，可催化过氧化氢(H₂O₂)依赖的次氯酸(HOCl)和其它活性物质的形成，这些化合物与大分子的反应导致酪氨酸残基、脂质和胆固醇的亚硝化、氯化和氧化，以及蛋白质和DNA的分子间交联。MPO作为一种前蛋白被合成，经过蛋白质水解去除了48个氨基酸的信号肽、116个氨基酸的前肽、C末端丝氨酸和6个氨基酸的内部肽，得到了长度分别为60kDa和12kDa的重链和轻链。MPO的其它翻译后修饰包括血红素部分的插入、糖基化和甘露糖残基的磷酸化。活化的MPO是一种二硫键连接的四聚体，含有两个血红素基团以及重链和轻链各两个拷贝。成熟的人MPO与小鼠和大鼠MPO有87-88%的氨基酸序列同源性。

MPO结合白蛋白(albumin)、巨噬细胞甘露糖受体(mannose receptor)、血管内皮细胞上的细胞角蛋白1 (cytokeratin 1)、高分子量激肽原(kininogen)和中性粒细胞上的整合素CD11b/CD18。这些相互作用促进MPO的清除，一氧化氮和缓激肽(bradykinin)水平的降低，减少血管舒张，持续活化中性粒细胞。MPO基因的表达受甲状腺激素(thyroid hormone)、维甲酸(retinoic acid)、雌激素和PPARγ受体的调控。MPO基因启动子的多态性增加了类固醇反应性，并与多种疾病的发展或严重程度有关。

中性粒细胞的MPO储存于细胞质中的嗜苯胺蓝颗粒中，在细胞活化和脱粒(degranulation)后，MPO被输送至吞噬体(phagosomes)，在那里它是杀死被吞噬细菌所必需的物质。活化的中性粒细胞也在细胞外释放颗粒物。血浆MPO水平升高与多种疾病相关，包括全身性炎症、子痫(eclampsia)、血管内皮功能障碍、多发性硬化和氧化应激等。MPO水平在关节炎滑液和牙龈炎龈沟液中亦有升高。此外，MPO水平与动脉粥样硬化斑块和肾结石相关，被视为炎症或损伤组织中性粒细胞浸润的指标。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人MPO的浓度，其原理见图1。人MPO特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人MPO会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记抗人MPO抗体后，辣根过氧化物酶标记抗人MPO抗体与人MPO结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人MPO浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。