碧云天的2019-nCoV Nucleocapsid Protein ELISA Kit (2019-nCoV Nucleocapsid Protein Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即新型冠状病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid Protein, N Protein)酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测血清、血浆及细胞培养上清液等样品中的N Protein的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为0.74ng/ml。板内、板间变异系数(coefficients of variation, CV)均小于10%。

2019年底由新型冠状病毒引起的肺炎疫情，从2020年初开始在全球大流行，感染病例快速上升，引发全球关注。该病毒被世界卫生组织(WHO)命名为2019-nCoV，被国际病毒分类委员会命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠状病毒导致的疾病，被世界卫生组织正式命名为冠状病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19），通常称为新型冠状病毒肺炎，简称“新冠肺炎”。

新型冠状病毒(2019-nCoV)属于单正链的RNA病毒，与SARS-CoV以及MERS-CoV具有较高的同源性。新型冠状病毒的基因组包含11个基因，其中功能较为重要的5个基因分别是：ORF1ab基因、S基因、E基因、M基因、N基因。N基因(Gene ID: 43740575，Protein_Id为YP_009724397.2)编码的N蛋白是一种核衣壳碱性磷酸化蛋白(nucleocapsid phosphoprotein)，位于病毒颗粒的核心部分，N蛋白首先是与基因组RNA在胞浆中结合形成螺旋卷曲的核衣壳，并与M、E蛋白相互作用后包裹进入病毒衣壳内，S蛋白在病毒膜出芽成熟时插入，并与M蛋白相用后形成病毒体从囊泡中释放。N蛋白在病毒的包装、复制和蛋白质翻译等过程中起关键作用。作为一种高度保守的抗原蛋白，N蛋白可用于特异性识别患者样本中的病毒靶点抗原，所以N基因和N蛋白常作为冠状病毒的检测诊断工具。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中N Protein的浓度，其原理见图1。N Protein特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的N Protein会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记的抗N Protein抗体后，辣根过氧化物酶标记抗N Protein抗体与N Protein结合，形成夹心的免疫复合物。 最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。N Protein浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中N Protein浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

本试剂盒不含会造成病毒感染的试剂，但由于检测样品可能来自于感染或康复2019-nCoV的患者及未感染的人群(可能为无症状感染者)，所以应在严格防护的条件下进行检测。本试剂盒需在生物安全等级Biosafety Level 2 (BSL-2)或更高标准的经认证的II级生物安全柜中使用。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。