碧云天的Mouse P-selectin/CD62P ELISA Kit (Mouse P-selectin/CD62P Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠P-选择素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的P-selectin/CD62P的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为58pg/ml，与小鼠的E-selectin、L-selectin、ICAM-1、ICAM-2、VCAM-1均没有交叉反应，与人的P-selectin没有交叉反应性。板内、板间变异系数均小于10%。

P-选择素(P-selectin)，也称为GMP-140、LECAM-3、PADGEM和CD62P，是一种细胞表面糖蛋白，在淋巴细胞迁移到组织中起关键作用。在内皮细胞的Weibel-Palade小体和血小板的α颗粒中，它以预先形成的状态被发现。储存的P-selectin在几分钟内被动员到细胞表面，以响应各种炎症或血栓形成剂。动员的P-selectin明显存在于细胞表面仅几分钟，然后循环至细胞内隔室。其他证据表明，通过炎症介质的治疗，内皮细胞中P-selectin mRNA的转录可以被激活。P-selectin由一个NH2末端凝集素C型结构域、一个EGF样结构域、九个补体控制结构域、一个跨膜结构域和一个短细胞质结构域组成。

研究表明，P-selectin参与髓样细胞、B细胞和T细胞亚群与活化内皮细胞的粘附。P-selectin还参与血小板与单核细胞和中性粒细胞的粘附，在血栓内中性粒细胞积聚中起着核心作用。白细胞和中性粒细胞与内皮细胞的粘附是由微弱的相互作用引起的，这种相互作用在内皮表面产生白细胞和中性粒细胞的特征性“滚动(Rolling)”运动。P-selectin与L-selectin协同作用，参与这些初始相互作用的调解。更强的相互作用，可能涉及E-selectin，遵循最初的相互作用，最终导致通过血管壁外渗到淋巴组织和炎症部位。sLex (Sialyl Lewis X)已被鉴定为P-和E-selectin的配体，但P-、E-和L-selectin在适当条件下与sLex和sLea (Sialyl Lewis A)均可结合。据报道，P-selectin还选择性地结合存在于小鼠骨髓细胞上的糖蛋白，以及人类骨髓细胞、血液中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞上的糖蛋白，称为P-selectin糖蛋白配体-1 (P-selectin Glycoprotein ligand-1, PSGL-1)，该配体也可结合E-selectin。P-selectin介导的白细胞滚动可被PSGL-1特异性单克隆抗体完全抑制[1-2]。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠P-selectin/CD62P的浓度，其原理见图1。小鼠P-selectin/CD62P特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠P-selectin/CD62P会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠P-selectin/CD62P抗体后，生物素化抗小鼠P-selectin/CD62P抗体与小鼠P-selectin/CD62P结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠P-selectin/CD62P浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图 。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。