碧云天的Human ST2/IL-33 R ELISA Kit (Human ST2/IL-33 R Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit, High-sensitive)，即人ST2酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清或细胞培养上清液中的ST2的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为28pg/ml，与人IL-1α、IL-1β、IL-1ra、小鼠ST2/Fc Chimera均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

ST2，又称白细胞介素33受体(IL-33 R)，属于IL-1糖蛋白受体家族，参与Th2型免疫应答。ST2主要表达在肥大细胞、活化的Th2细胞、巨噬细胞和心肌细胞表面。人ST2由538个氨基酸分子组成，其中包括310个氨基酸分子的胞外域，21个氨基酸分子的跨膜域和207个氨基酸分子的胞内域。在胞外域中具有3个免疫球蛋白样区域。完整的人ST2分子量为120kDa，经过选择性剪切后会得到分子量为60kDa的游离ST2。人ST2胞外域与小鼠ST2胞外域和大鼠ST2胞外域分别具有68%和64%的氨基酸同源性。

IL-33通过与ST2结合发挥多种生物学活性。游离型ST2作为诱骗受体同样也会与IL-33结合，从而阻止IL-33与跨膜ST2受体结合发挥作用。分泌型IL-33与ST2结合后能够促进Th2型免疫应答，导致嗜酸性粒细胞增多症和过敏反应。同时会上调Th2细胞和肥大细胞中炎性细胞因子及趋化因子的表达。此外，IL-33与跨膜ST2受体结合后，还会增强炎症相关的伤害性感受，避免动脉粥样硬化和心肌肥大。在过敏性哮喘、败血症、创伤、登革热、肺病等炎性条件下，游离型ST2血浆水平会有所升高，多种心脏疾病也会导致血浆ST2浓度上升，例如主动脉瓣狭窄、充血型心肌病和心力衰竭等。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人ST2/IL-33 R的浓度，其原理见图1。人ST2/IL-33 R特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人ST2/IL-33 R会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人ST2/IL-33 R抗体后，生物素化抗人ST2/IL-33 R抗体与人ST2/IL-33 R结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人ST2/IL-33 R浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。