碧云天生产的Human TGF-β3 ELISA Kit (Human Transforming Growth Factor-β3 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人转化生长因子-β3酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的TGF-β3的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为29.4pg/ml， 与人的TGF-β1、Latent TGF-β1、TGF-β2、TGF-βRII等均没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。

TGF-β (Transforming growth factor-β, TGF-β)对细胞的生长增殖、分化、凋亡、迁移和免疫具有重要的调节作用，存在三种亚型，分别为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，三个亚型均可以结合细胞表面相同的受体。TGF-β3及其密切相关的蛋白质TGF-β1和TGF-β2作为细胞开关调节免疫功能、细胞增殖和上皮-间质转化。此外，TGF-β3的作用还包括参与腭发育、软骨发育和肺发育。成熟的人TGF-β3分别与小鼠/狗/马、大鼠和猪TGF-β3有100%、99%和98%的同源性。人类TGF-β3 cDNA编码412个氨基酸的前体(由1个含20个氨基酸的信号肽和1个含392个氨基酸的前体蛋白组成)。前体经Furin样转化酶(Furin­like convertase)处理，生成延迟相关肽(Latency associated peptide, LAP)和成熟的TGF-β3 [1]。TGF-β3与LAP以复合物的形式分泌，随后被纤溶酶(Plasmin)、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteases)、凝血酶反应蛋白-1 (Thrombospondin-1)和整合素亚群(Subset of integrins)切割后变得活跃[2]。TGF-β3与TGF-βRII具有高亲和力，该受体磷酸化并激活TGF-βRI或ALK-1 (Activin receptor-like kinase-1)，通过Smad磷酸化调节转录[3]。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人TGF-β3的浓度，其原理见图1。人TGF-β3特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人TGF-β3会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人TGF-β3抗体后，生物素化抗人TGF-β3抗体与人TGF-β3结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人TGF-β3浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。