碧云天的Human Tie-2/Tek ELISA Kit (Human Tie-2/Tek Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人酪氨酸激酶受体Tie-2酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Tie-2的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为118pg/ml，与人的Angiopoietin-1、Angiopoietin-2、Angiopoietin-4、小鼠mouse Tie-2/Fc Chimera、大鼠Tie-2/Fc Chimera均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

Tie-2，又称为Tek，是一种表达在内皮细胞上的酪氨酸激酶受体，参与血管生成。Tie-2的配体主要有Ang-1, Ang-2, Ang-3和Ang-4，其中Ang-1, Ang-2, Ang-4均表达在人体内，而Ang-3则在小鼠体内表达。Tie-2基因编码产生含有1122个氨基酸分子的多肽，其中胞外域具有明显的结构特征：两个免疫球蛋白样环结构被三个EGF样重复单元所分隔，其中在第二个免疫球蛋白样环的后面还有3个纤维蛋白原III型同源体。Tie-2的胞内域含有两个酪氨酸激酶域，当其发生磷酸化时，就能够与Grb2, Grb7, Grb14, Shp2, PI3K的p85亚基和Dok-R等分子结合。若缺失胞内域C端的最后16个氨基酸，则会导致Tie-2自身磷酸化水平增加。Tie-2与其他Tie受体家族成员大约具有46%的相似性。

一些体内研究证实了Tie-2在血管生成过程中的重要性。Tie-2缺失的小鼠通常会在胚胎期第10.5天出现死亡，并且表现出重度的血管缺陷，例如头部血管的异常扩张、心肌血管复杂性降低和血管内皮细胞数量减少等。另外，Tie-2突变会使得受体活性增加6-10倍，这会导致血管畸形的发生。关于其中涉及到的具体机制，有体外研究实验表明，Ang-1与Tie-2结合后，会促使内皮细胞迁移，血管新生和存活。Ang-2作为Ang-1的竞争性抑制剂，与Tie-2结合后会导致血管内皮细胞的死亡和退化，但是当VEGF存在的情况下，Ang-2/Tie-2结合则会促进新的血管生成。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Tie-2/Tek的浓度，其原理见图1。人Tie-2/Tek特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Tie-2/Tek会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Tie-2/Tek抗体后，生物素化抗人Tie-2/Tek抗体与人Tie-2/Tek结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Tie-2/Tek浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。