碧云天的Human Visfatin/PBEF/NAMPT ELISA Kit (Human Visfatin/PBEF/NAMPT Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人内脏脂肪素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Visfatin/PBEF/NAMPT的ELISA试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为232pg/ml，与人的HIC5、LIM1无交叉反应性，与小鼠的Visfatin/PBEF/NAMPT有33%交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。

内脏脂肪素(Visfatin/PBEF/NAMPT)，简称内脂素，也称为前B细胞克隆增强因子(pre-B-cell colony enhancing factor, PBEF)或烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase, NAMPT)，由491个氨基酸组成，分子量为52kDa，通过19个β-转角和13个α-螺旋形成两个结构域。研究表明，机体内的Visfatin/PBEF/NAMPT的功能结构是以两个相同亚基形成的二聚体，并且两个亚基都能催化烟酰胺和磷酸核糖焦磷酸转化为烟酰胺单核苷酸(NMN)的活性中心。Visfatin/PBEF/NAMPT在进化过程中蛋白质序列高度保守，具有极其重要的生理功能。Visfatin/PBEF/NAMPT具有类胰岛素效应，能直接与胰岛素受体结合(非竞争性结合)，激活胰岛素调节脂肪细胞糖代谢的相关信号通路，通过提高脂肪和肌肉组织葡萄糖摄取能力，降低肝脏葡萄糖的释放来影响血糖水平，调节体内糖代谢。Visfatin/PBEF/NAMPT血浆水平增加还与肥胖存在一定关系，它可以通过自分泌或旁分泌途径作用于脂肪组织，诱导PPAR-γ、SREBP-2、FAS、Ap2等脂肪细胞分化关键因子表达增强，从而促进脂肪细胞分化，促使葡萄糖生成甘油三酯沉积在脂肪细胞中。此外，Visfatin/PBEF/NAMPT能激活NF-κB信号转导通路，诱导炎症细胞因子的产生，产于机体免疫调节。

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Visfatin/PBEF/NAMPT的浓度，其原理见图1。人Visfatin/PBEF/NAMPT特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Visfatin/PBEF/NAMPT会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人Visfatin/PBEF/NAMPT抗体后，生物素化抗人Visfatin/PBEF/NAMPT抗体与人Visfatin/PBEF/NAMPT结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Visfatin/PBEF/NAMPT浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1.双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。

标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效，试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。

由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。

洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。

TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。

加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。

由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。

充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。

本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。

洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。

加样过程中须避免气泡的产生。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。