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产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D2006 | pUCm-T载体 | 20次 | 279.00元 |
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中,形成含有目的片段的重组载体。
pUCm-T载体的主要信息如下: | |
Base pairs | 2773 |
Lac Z promoter | 142-171 |
M13/pUC Reverse Primer | 204-221 |
Lac Z | 222-534 |
Multiple cloning region | 233-376 |
M13/pUC Sequencing Primer | 378-395 |
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 972-1832 |
ColE1 origin of replication(rep) | 1987-2606 |
pUCm-T载体的图谱如图1:
图1. pUCm-T载体图谱示意图
pUCm-T载体质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2006 pUCm-T vector.pdf。
pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括:
Afl II | Age I | Apa I | Asc I | Avr II | Bbs I | Bbv II | Bcl I |
Blp I | BsaA I | BseR I | Bsg I | BsiC I | BsiW I | Bsm I | BsmF I |
Bsp120 I | BspM II | BsrG I | BssH II | Bst1107 I | BstB I | BstE II | BstX I |
Bsu36 I | Dra III | Eco47 III | Eco72 I | Esp I | Fse I | Hpa I | Mlu I |
Msc I | Mun I | Nae I | NgoM I | Nhe I | Nru I | Nsi I | PflM I |
Pme I | Pml I | PpuM I | PspA I | Rsr II | Sac II | Sfi I | Sma I |
SnaB I | Spe I | Spl I | Srf I | Stu I | Xca I | Xma I |
pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括:
pUCm-T载体的全序列信息: D2006 pUCm-T vector-seq.txt
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成,除多克隆位点外,其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因,而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体,由于插入片段破坏了LacZ基因,因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆,蓝白斑筛选结果示意图如图2。
图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接,转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆,其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中,但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定,也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录,用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2006 | pUCm-T载体 | 20μl |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况,不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应,再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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