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碧云天 QuickMutation基因随机突变试剂盒(D0219M)

PCR相关

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市场价¥5248
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  • 商品名称:碧云天 QuickMutation基因随机突变试剂盒(D0219M)
  • 商品编号:D0219M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2019-09-03
  • 商品毛重:10.100千克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D0219S QuickMutation™基因随机突变试剂盒 50次 1726.00元
D0219M QuickMutation™基因随机突变试剂盒 200次 5248.00元

碧云天生产的QuickMutation™基因随机突变试剂盒(QuickMutation™ Random Mutagenesis Kit)是一种基于易错PCR(Error Prone PCR)的方法使目的基因片段通过PCR扩增后发生一定几率的随机突变的试剂盒。
基因的随机突变是研究蛋白结构与功能的关系、以及抑制或者改良甚至创造蛋白或酶活性的重要方法。
易错PCR方法通常是指通过易错耐热DNA聚合酶进行PCR扩增,从而在目的基因序列中引入随机突变的方法。易错PCR方法在目的基因序列中引入随机突变后,最终很可能在蛋白水平上产生氨基酸序列的突变,从而可以随机产生活性更强、更弱甚至失去活性的蛋白或酶,也有可能使蛋白或酶产生新的活性。

为了分析蛋白结构和功能的关系,理想的突变应该是每个蛋白发生1个氨基酸改变(1-2核苷酸突变);在蛋白进化研究方面,理想的突变是每个蛋白发生1-4个氨基酸改变(约2-7核苷酸突变);从突变文库中筛选高活性的蛋白或者酶则通常希望每个基因产生20个左右的核苷酸突变。
本试剂盒提供的RandomMut DNA polymerase,是一种全新的专门用于易错PCR的DNA聚合酶,在配套的反应缓冲液中加入推荐量的Mutation enhancer情况下,可以在每kb的基因中引入约7.8个随机突变,而且这些突变是AT→GC和GC→AT两个方向的突变基本均衡的,(AT→GC mutations) / (GC→AT mutations) = 1.06,同时还会引入适量的插入(insertion)和缺失(deletion)突变。
本试剂盒扩增出来的DNA片段为黏性末端,可以直接用于常规的T载体克隆。
本试剂盒可扩增长达6kb的目的片段。
用户可以自行调整本试剂盒的突变几率,使用更加便捷。本试剂盒提供了Mutation enhancer (10X),通过改变Mutation enhancer的用量可以显著影响突变率(参见表1)。

表1. 利用QuickMutation™基因随机突变试剂盒使用不同浓度的Mutation enhancer PCR扩增1000bp片段后双酶切插入空载体,然后随机挑选若干克隆进行测序分析的结果。PCR扩增的1000bp模板片段插入在约4kb的质粒中,测试时1000bp模板的用量是120pg/µl,相当于模板质粒的用量为600pg/µl,PCR循环数为30。

0.5X Mutation enhancer 1X Mutation enhancer 2X Mutation enhancer
Total mutations found
63 98 134
Mutations
Mutations Percentage Mutations Percentage Mutations Percentage
A→T
8 12.7% 10 10.2% 21 15.7%
A→G
10 15.9% 13 13.3% 21 15.7%
A→C
1 1.6% 2 2.0% 4 3.0%
T→A
7 11.1% 10 10.2% 15 11.2%
T→G
1 1.6% 4 4.1% 2 1.5%
T→C
8 12.7% 15 15.3% 17 12.7%
G→A
11 17.5% 13 13.3% 10 7.5%
G→T
1 1.6% 6 6.1% 6 4.5%
G→C
2 3.2% 4 4.1% 8 6.0%
C→A
2 3.2% 3 3.1% 8 6.0%
C→T
5 7.9% 10 10.2% 13 9.7%
C→G
3 4.8% 3 3.1% 4 3.0%
Insertions
1 1.6% 1 1.0% 0 0.0%
Deletions
3 4.8% 4 4.1% 5 3.7%
Bias Indicators (AT→GC/GC→AT)
(AT→GC) / (GC→AT)
1.05 1.06 1.19
A→N, T→N
19+16=35 55.6% 25+29=54 55.1% 46+34=80 59.7%
G→N, C→N
14+10=24 38.1% 23+16=39 39.8% 24+25=49 36.6%
Transitions
A→G, T→C
18 28.6% 28 28.6% 38 28.4%
G→A, C→T
16 25.4% 23 23.5% 23 17.2%
Transversions
A→T, T→A
15 23.8% 20 20.4% 36 26.9%
A→C, T→G
2 3.2% 6 6.1% 6 4.5%
G→C, C→G
5 7.9% 7 7.1% 12 9.0%
G→T, C→A
3 4.8% 9 9.2% 14 10.4%
Insertions and Deletions
Insertio
ns
1 1.6% 1 1.0% 0 0.0%
Deletions
3 4.8% 4 4.1% 5 3.7%
Mutation Frequency
Mutations/kb (per PCR)
5.5 7.8 10.7
突变碱基数范围
0-11 3-12 4-18

本试剂盒如果用于20µl的PCR突变体系,两种包装的本试剂盒分别可以进行50次和200次基因随机突变,如果用于50µl的PCR突变体系,两种包装的本试剂盒分别可以进行20次和80次基因随机突变。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D0219M-1 RandomMut DNA polymerase 80µl
D0219M-2 RandomMut buffer (10X) 600µl
D0219M-3 Mutation enhancer (10X) 600µl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
PCR反应非常灵敏,在使用RandomMut DNA polymerase进行PCR扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量设置不加模板的空白对照。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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