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碧云天 BeyoRT III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)(D7180M)

PCR相关

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  • 商品名称:碧云天 BeyoRT III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)(D7180M)
  • 商品编号:D7180M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2019-09-03
  • 商品毛重:10.100千克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7180S BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser) 20次 153.00元
D7180M BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser) 100次 595.00元
D7180L BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser) 500次 2465.00元

碧云天生产的BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser),即BeyoRT™ III First Strand cDNA Synthesis Kit with gDNA EZeraser,是一种同时提供了快速高效去除基因组DNA污染的gDNA EZeraser和BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)的反转录试剂盒。加入gDNA EZeraser后仅需在37℃加热2分钟,就能有效去除基因组DNA污染,后续无需任何额外步骤,仅需加入水和BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)就能进行反转录的非常简单、便捷、快速、稳定并且非常高效的cDNA第一链合成试剂盒。本产品对于3kb以下片段,10min就能完成反转录;产物长度可以长达12kb;可以在55℃进行高温反转录,有效解决复杂二级结构RNA反转录难的问题;预混液(5X)在-20℃不会结冻,取用非常便捷。
本试剂盒中的BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)包含了经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶、RNase Inhibitor、Oligo(dT)18 Primer、Random Hexamer Primer、dNTPs、MgCl2和反转录反应缓冲液,只需加入RNA模板和水(DEPC-treated Water或DNase/RNase-Free Water)就能进行反转录反应,大大简化了反转录的实验操作,使操作最为便捷,能有效避免常规反转录非常复杂的操作过程中可能导致的操作误差、孔间污染等,使反转录的重复性和平行性大幅提升。
本产品可广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成,后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR (quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建,尤其是反转录所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等,也可以通过引物延伸(primer extension)来分析和研究RNA。
本产品中的gDNA EZeraser其主要有效成分为热敏性dsDNase (Thermolabile dsDNAse),能特异性地降解双链基因组DNA,效率高,作用时间短,在充分去除残留基因组DNA之后不会对cDNA造成显著影响。热敏性dsDNase加入本试剂盒中的BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)就能充分抑制其活性,并且在55℃加热5min就能导致完全失去酶活性。后续如果用于常规PCR或qPCR,PCR的首次变性条件能充分失活gDNA EZeraser,因此不必担心gDNA EZeraser对于后续的常规PCR或qPCR的干扰。使用本产品可以有效避免总RNA中的gDNA对于后续qPCR定量的干扰。另一方面,也有助于简化qPCR引物设计,无需进行跨内含子引物设计。
BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)中的BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase,是一种经过改造和优化的快速高效(短至10min完成反转录)、热稳定(高达55℃)、高精确度、产物超长(长达12kb)的M-MLV反转录酶,具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能够以RNA或DNA为模板,在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成,即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成,同时它保留了RNase H的活力,能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,有利于后续cDNA第二链的合成。
本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录,反转录的最大长度可以达到12 kb。BeyoRT™ III M-MLV反转录酶热稳定性好,反转录效率高,最适反应温度为42℃,当温度达到50℃时仍具有很高活性。对于长度较短的cDNA反转录,温度达到55℃时也可获得较高产量的cDNA。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录,能有效减少二级结构,提升反转录效率。反转录速度快,6kb以下的cDNA反转录只需0.5h即可完成,3kb以下的cDNA反转录10min即可完成。
本产品反转录效率高,BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)的反转录效率与非预混液的反转录效率一致(参考图1)。
如果希望进行常规的反转录操作,可以单独选购BeyoRT™ III M-MLV反转录酶(D7176),RNase Inhibitor (R0102)dNTP mix (D7373),或者选购BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒(D7178)进行反转录反应。
本产品操作便捷,去除基因组DNA污染仅需2分钟,同时采用了第一链合成预混液(5X),即反转录预混液(5X),后续只需加入水和反转录预混液(5X),即可快速进行反转录反应,并且BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)在-20℃不会结冻,使用非常便捷。
本产品重复性好,反转录所有试剂预混合,大大减少操作步骤,有效降低污染几率和操作误差,使实验结果更加一致,重复性更好。

图1. 使用碧云天的BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser)和使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶的常规反转录体系的效果对比图。在20μl的反转录反应体系中,以HEK293T细胞中提取的1µg总RNA为模板,没有加入反转录酶、分别使用BeyoRT™ III M-MLV反转录酶的常规反转录体系和BeyoRT™ III cDNA合成试剂盒(with gDNA EZeraser),42℃反转录60min。然后取1μl反转录产物分别进行两个目的基因的PCR扩增和电泳检测。

失活或抑制:80℃孵育10min可以导致本产品中的BeyoRT™ III M-MLV反转录酶失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ III M-MLV反转录酶有抑制作用。55℃孵育5min可以导致本产品中的gDNA EZeraser失活,并且本试剂盒中的BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X)在反转录体系中能充分抑制gDNA EZeraser活性。
对于20μl反转录体系,本试剂盒的不同包装分别足够进行20次、100次和500次反转录反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7180M-1 BeyoRT™ III cDNA第一链合成预混液(5X) 400μl
D7180M-2 gDNA EZeraser 100μl
D7180M-3 gDNA EZeraser Buffer (10X) 120μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
对于GC含量比较高的RNA的反转录,产品的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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