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碧云天 耐血HemoTaq高保真(high-fildelity) DNA聚合酶(D7243M)

PCR相关

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  • 商品名称:碧云天 耐血HemoTaq高保真(high-fildelity) DNA聚合酶(D7243M)
  • 商品编号:D7243M
  • 品牌:碧云天
  • 上架时间:2019-09-03
  • 商品毛重:10克
  • 库存: 65535
  • 详细参数>>
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7243S HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant) 200次 316.00元
D7243M HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant) 1000次 1162.00元

碧云天生产的HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant),即耐血HemoTaq™高保真(high-fildelity) DNA聚合酶,是一种经过基因工程改造的非常高效的并且具有高保真性的适用于EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血样品或干血斑样品直接PCR检测的耐热DNA聚合酶。
对于全血样品可以直接PCR检测,无须提取DNA。本产品对人、小鼠等全血中血红素等各种PCR抑制剂表现出超强的抗性,对于新鲜采集的、4℃保存或低温冻存EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝的人或小鼠血液样品或者干血斑(如whatman903或FTA采血卡上的干血斑),都无需进行DNA提取纯化,可以直接用于PCR扩增目的DNA。
所需血样少,耐血能力高。本产品用于20μl的PCR扩增体系时,通常仅加入约1μl抗凝全血即可顺利完成PCR检测。用于检测细菌、病毒等微生物感染时,为获得最高的检测灵敏度,20μl的PCR扩增体系中最大加入的血液量可以达到4μl,即20%体积,有些类型的抗凝血(例如人肝素抗凝血)最大加入的全血体积可以达到10μl,即50%体积。
兼容EDTA、肝素或柠檬酸钠三种常见抗凝血。血液样品用于PCR检测时,EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血都可以兼容的。如果希望取得最佳的检测效果,优先推荐EDTA抗凝血。因为EDTA可以螯合多种核酸酶发挥酶活性所必须的金属离子,从而可以更好地抑制核酸的降解。
本产品提供了一对阳性对照引物,便于确认PCR检测效果。该对引物是一种人和小鼠的通用引物,可以扩增人或小鼠基因组DNA中β-actin基因的300bp DNA片段。
本产品的耐血体积百分比可以达到20-50%。本产品用于肝素、柠檬酸钠和EDTA抗凝血PCR检测的效果参考图1。图中可见,本产品对肝素(heparin)、柠檬酸钠和EDTA处理的人全血的耐受体积百分比可以达到50%、20%和40%。对于小鼠全血的PCR检测,本产品可以耐受的体积百分比也不小于20%。综上,本产品用于PCR检测时,推荐的全血的使用量为PCR总体积的1-20%,最优先的推荐用量为5-10%。
图1. 碧云天生产的HemoTaq™ HF DNA Polymerase扩增图中所示不同抗凝剂采集的人抗凝全血中目的基因的检测效果图。使用HemoTaq™ HF DNA Polymerase及本产品提供的Control primer mix,在PCR体系中直接加入不同体积百分比的不同抗凝剂采集的人抗凝血,用于扩增β-actin基因的300bp DNA片段后的电泳效果图。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)的保真性高于Pfu DNA Polymerase (D7216/D7217),和更高保真性的BeyoFusion™ DNA Polymerase (D7220/D7221)的保真性相近。因此本产品不仅可以用于血液检测目的,也可以用于PCR扩增并克隆特定基因。
本产品可以轻松扩增5kb或更长的目的片段。本产品扩增不同长度目的基因的效果参考图2。图中可见,HemoTaq™ HF DNA Polymerase以柠檬酸钠抗凝全血为模板可以直接PCR扩增出5kb或更长的DNA片段。
图2. 碧云天生产的HemoTaq™ HF DNA Polymerase直接以10%柠檬酸钠抗凝全血为模板扩增不同长度的目的基因的效果图。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands)); 1, β-actin (300bp); 2, CCR5 (630bp); 3, CCR5 (1100bp); 4, CCR5 (2000bp); 5, IL-6 (2841bp); 6, IL-6 (4171bp); 7, IL-6 (4882bp)。
本产品扩增获得的PCR产物为平末端,不能直接用于和T载体连接进行TA克隆。
来源:大肠杆菌重组表达纯化获得。
用途:抗凝血样品基因组DNA中目的基因的直接扩增、基因分型(如基因缺失等)、血液样品中细菌、病毒等微生物感染的基因检测,以及基因敲除或转基因小鼠基因型分析。本产品和D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase相比,由于保真性更高,更适合用于血液样品中目的基因的扩增和克隆。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,满足常规PCR反应要求。
酶储存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使HemoTaq™ HF DNA Polymerase失活。
本产品如果用于50微升的PCR反应体系,两种包装的本产品分别足够用于80个和400个反应;如果用于20微升的PCR反应体系,两种包装的本产品分别足够用于200个和1000个反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7243M-1 HemoTaq™ HF DNA Polymerase 400μl
D7243M-2 10X HemoTaq™ HF PCR Buffer 2ml
D7243M-3 Control primer mix (10μM each) 250μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
由于PCR反应非常灵敏,在使用HemoTaq™ HF DNA Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
设置PCR反应体系时,抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5%左右,可以直接添加到PCR体系中,无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后,建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片,便于吸取上清用于电泳分析等。注意:由于抗凝血本身的原因,PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。
需自备dNTP和Nuclease-Free Water。推荐选购碧云天生产的D7371 dNTP Mixture (2.5mM each)D7373 dNTP Mixture (25mM each),以及ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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