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产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
D2916-1μg | pET-N-GST-PreScission | 1μg | 888.00元 |
D2916-100μg | pET-N-GST-PreScission | 100μg | 1169.00元 |
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点,可通过PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。
通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 12-467 |
Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
PBR 322 origin | 2084 |
LacI coding sequence | 3518-4597 |
T7 promoter | 4988-5004 |
GST tag coding sequence | 5076-5732 |
PreScission recognition site sequence | 5733-5756 |
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) | 5757-5804 |
T7 Terminator | 5872-5918 |
pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱如下:
pET-N-GST-PreScission质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2916 pET-N-GST-Precission.pdf。
pET-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括:
AatII | Acc65I | AflII | AgeI | AhdI | AleI | AscI |
AvrII | BaeI | BbvCI | BfuAI | BmgBI | BmtI | BsaI |
BseRI | BsiWI | BspMI | BsrGI | Bsu36I | CspCI | EagI |
Eco53kI | FseI | KpnI | MfeI | NcoI | NheI | NotI |
PacI | PmeI | PmlI | PspXI | RsrII | SacI | SacII |
SbfI | SexAI | SfiI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI |
ZraI |
pET-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括:
DraIII | CAC,NNN`GTG | 242 | MluI | A`CGCG,T | 4242 |
PsiI | TTA|TAA | 370 | BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4563 |
PvuI | CG,AT`CG | 943 | SphI | G,CATG`C | 4771 |
AsiSI | GCG,AT`CGC | 943 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 4923 |
SmaI | CCC|GGG | 1067 | XbaI | T`CTAG,A | 5034 |
XmaI | C`CCGG,G | 1067 | NdeI | CA`TA,TG | 5074 |
TspMI | C`CCGG,G | 1069 | MscI | TGG|CCA | 5286 |
NruI | TCG|CGA | 1286 | BstBI | TT`CG,AA | 5476 |
AcuI | CTGAAG(N)14,NN` | 1597 | SwaI | ATTT|AAAT | 5506 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1729 | ScaI | AGT|ACT | 5652 |
BssSI | C`ACGA,G | 1968 | BamHI | G`GATC,C | 5757 |
BstZ17I | GTA|TAC | 2374 | HindIII | A`AGCT,T | 5763 |
Tth111I | GACN`N,NGTC | 2399 | PstI | C,TGCA`G | 5769 |
PflFI | GACN`N,NGTC | 2399 | EcoRI | G`AATT,C | 5775 |
PpuMI | RG`GWC,CY | 3136 | EcoRV | GAT|ATC | 5783 |
FspI | TGC|GCA | 3164 | SalI | G`TCGA,C | 5787 |
BglI | GCCN,NNN`NGGC | 3182 | BglII | A`GATC,T | 5793 |
PshAI | GACNN|NNGTC | 3401 | XhoI | C`TCGA,G | 5799 |
HpaI | GTT|AAC | 3740 | PaeR7I | C`TCGA,G | 5799 |
BssHII | G`CGCG,C | 3831 | BlpI | GC`TNA,GC | 5860 |
NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 4041 | StyI | C`CWWG,G | 5882 |
BstEII | G`GTNAC,C | 4060 |
pET-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-GST-PreScission的全序列信息:D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2916-1μg | pET-N-GST-PreScission | 1μg |
D2916-100μg | pET-N-GST-PreScission | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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