碧云天 的Human/Mouse/Rat BDNF ELISA Kit (Human/Mouse/Rat Brain Derived Neurotrophic Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠脑源性神经营养因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地 定量检测人、小鼠和大鼠血清、血浆细胞培养上清液中的BDNF的ELISA试剂盒。本试剂盒适用于人、小鼠和大鼠多个物 种BDNF的检测。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为21pg/ml，与人EGF、Epo、FGF basic、G-CSF、GDNF、GM-CSF、HGF、IGF-I、IGF-II、IL-13、KGF、PDGF-AB等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
成熟的人脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurotrophic Factor, BDNF)是一种分子量在13kDa，氨基酸长度为119的非糖基化多肽，其结构在所有哺乳动物间高度保守。BDNF最初编码产生247个氨基酸的前体肽，包含18个氨基酸的信号序列、110个氨基酸的前体序列和119个氨基酸的成熟片段。和其他的神经营养因子类似，BDNF分子N端具有多种剪切方式，因而能产生多种不同的功能特性。成熟的BDNF与神经生长因子(Nerve Growth Factor, NGF)具有52%的氨基酸同源性，在游离状态以非共价键形成的同源二聚体形式存在，包含6个半胱氨酰残基，这6个半胱氨酸残基之后会形成3个链内二硫键。表达BDNF的细胞主要包括成纤维细胞、星形胶质细胞、不同表型的神经元细胞、巨核细胞/血小板、施万细胞和平滑肌细胞等。BDNF的保守结构使得BDNF ELISA试剂盒能够被广泛应用于多个物种BDNF的检测。
BDNF至少有两种受体，一个是亲和力较低的神经生长因子受体(Low affinity Nerve Growth Factor Receptor, LNGFR)，分子量为75kDa；另一种是亲和力较高的原肌球蛋白激酶受体B (Tropomyosin Receptor Kinase-B, TrkB)，分子量为145kDa。LNGFR是一类I型跨膜糖蛋白，属于TNF受体家族成员，所有神经营养因子与LNGFR的亲和力几乎相同(Kd~1nM)。LNGFR能够参与信号传递，但这些通路激活后的生物学意义目前尚不明晰。对BDNF而言，LNGFR在神经元中也许是作为一种逆向运输分子，促进施万细胞向伤口处迁移，或者是调节TrkB的活性。TrkB与BDNF亲和力较高(Kd~10nM)，同样也能与NT-3和NT-4/5结合。人TrkB也属于I型跨膜糖蛋白，具有多种胞外域，人与大鼠的TrkB胞外域具有90%以上的氨基酸同源性。TrkB需要形成同源二聚体才能发挥活性，表达TrkB的细胞有脊髓处的运动神经元细胞、海马体中的锥体细胞、大部分神经元细胞以及胸腺细胞。
在发育过程中，BDNF能够参与神经元的分化、成熟和突触形成。在成人体内，BDNF最重要是发挥神经保护作用，例如在脑缺血时，BDNF能保护前脑神经元免受损害。
BDNF和TrkB的结合会引发多种细胞内信号通路激活，主要包括MAPK/ERK、PLCγ和PI3K等。一些小的G蛋白分子也参与其中，例如Ras、Rap-1等都是BDNF/TrkB信号传递过程中的重要分子。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中BDNF的浓度，其原理见图1。BDNF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的BDNF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗BDNF抗体后，生物素化抗BDNF抗体与BDNF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。BDNF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中BDNF浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。