碧云天的Human/Mouse/Rat Glucagon ELISA Kit (Human/Mouse/Rat Glucagon Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠胰高血糖素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人、小鼠和大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的Glucagon的ELISA试剂盒。本试剂盒适用于小鼠、大鼠和人等多种哺乳动物Glucagon的检测。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为20.8pg/ml，与人BDNF、β-NGF、NT-3
、NT-4、CNTF等均没有交叉反应，与大鼠胰高血糖素有35%的交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
胰高血糖素(Glucagon)是由胰腺产生的具有29个氨基酸的多肽，在葡萄糖代谢和维持血糖平衡过程中具有重要作用。胰高血糖素前体mRNA主要表达在胰岛α细胞、小肠L细胞和大脑内。胰岛α细胞表达激素原转化酶PC2，又称PCSK2，这是产生胰高血糖素所必须的酶。而在小肠L细胞中则表达激素原转化酶PC1，该酶能够加工前体胰高血糖素产生肠高血糖素和胃泌酸调节素。L细胞还能产生两种胰高血糖素样多肽，GLP-1和GLP-2，它们同样来源于胰高血糖素前体，并且同样能够影响葡萄糖代谢，但是与胰高血糖素不具有任何序列相似性。胰高血糖素在不同物种间具有高度保守性，在人、小鼠、大鼠、猪、狗、马等多种物种中均具有一致的氨基酸序列。
在正常的代谢过程中，胰高血糖素的分泌受到体内血糖水平影响，当血糖浓度过低时，胰高血糖素分泌会增加；而当出现血糖浓度升高时，胰高血糖素的分泌则会减少。尽管胰高血糖素的结合位点在肝脏、脑、胰腺、肾、小肠和脂肪组织中均有表达，但其发挥活性主要还是在肝脏中。胰高血糖素能够刺激糖原异生和肝糖原分解，从而增加血糖水平。胰高血糖素的分泌受到激素和神经传导物质的调控，游离葡萄糖浓度也能影响其分泌。胰岛素在一定程度上能够降低胰高血糖素的分泌，GABA和GLP-1也能减少胰高血糖素的分泌，然而一些L-谷氨酸、精氨酸和胰高血糖素本身则能够增加其分泌。
与胰岛素相同，在II型糖尿病患者中胰高血糖素的表达也会出现异常，并且会加重病情。在游离葡萄糖处于较高浓度时，胰岛素对胰高血糖素分泌的抑制作用减弱，从而引起胰高血糖素血症，增加了高血糖症的风险。瘦素能够抑制胰高血糖素的分泌，刺激β细胞分泌更多的胰岛素，但是胰高血糖素能够减弱瘦素介导的胰岛素的分泌。胰岛α细胞还能表达一种胃饥饿素受体，当与胃饥饿素作用后会增加胰高血糖素的分泌。另外，糖皮质激素也能够根据血糖浓度对胰高血糖素和胰岛素的分泌进行调节。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中Glucagon的浓度，其原理见图1。Glucagon特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的Glucagon会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗Glucagon抗体后，生物素化抗Glucagon抗体与Glucagon结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。Glucagon浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中Glucagon浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PG357-1	Glucagon抗体预包被板	8孔×12条
PG357-2	样品分析缓冲液	5ml
PG357-3	标准品稀释液	10ml
PG357-4	Glucagon标准品	2-4瓶
PG357-5	Glucagon生物素化抗体	10ml
PG357-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PG357-7	洗涤液(20X)	30ml
PG357-8	TMB溶液	10ml
PG357-9	终止液	5ml
PG357-10	封板膜(透明)	2张
PG357-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其他组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。