碧云天的Mouse PD-1 ELISA Kit (Mouse Programmed Death-1 receptor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠程序性死亡分子1酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的PD-1的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为55pg/ml，与小鼠B7-H1、PD-L2，人PD-1/Fc Chimera等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
程序性死亡分子(programmed death-1 receptor, PD-1)，又称CD279，是一种I型跨膜蛋白，属于免疫调节受体中的CD28家族。该家族中其它成员还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。成熟的小鼠PD-1包括149氨基酸长度的胞外域(ECD)、21个氨基酸长度的跨膜域和98个氨基酸长度的胞质域，其中胞外域中包括一个免疫球蛋白样V型区域。小鼠PD-1的胞外域与人PD-1胞外域具有65%的氨基酸同源性。胞质域中包含两个酪氨酸残基，这两个酪氨酸残基能够形成免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif, ITIM)和免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif, ITSM)，二者对于调节PD-1信号传递十分重要。PD-1主要表达在活化的T细胞、B细胞、单核细胞和树突状细胞，与相应配体PD-L1 (B7-H1)或PD-L2 (B7-DC)按1:1的比例相互作用。二者结合后会促进T细胞的凋亡和功能丧失，因此PD-1和PD-L1的相互作用是调节免疫应答和免疫耐受的重要环节。通过相应抗体封闭或遗传学基因改变阻止二者的相互作用能够有效改善肿瘤免疫治疗效果。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠PD-1的浓度，其原理见图1。小鼠PD-1特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠PD-1会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠PD-1抗体后，生物素化抗小鼠PD-1抗体与小鼠PD-1结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠PD-1浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠PD-1浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PP778-1	小鼠PD-1抗体预包被板	8孔×12条
PP778-2	样品分析缓冲液	5ml
PP778-3	标准品稀释液	10ml
PP778-4	小鼠PD-1标准品	2-4瓶
PP778-5	小鼠PD-1生物素化抗体	10ml
PP778-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PP778-7	洗涤液(20X)	30ml
PP778-8	TMB溶液	10ml
PP778-9	终止液	5ml
PP778-10	封板膜(透明)	2张
PP778-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组份4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组份严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 份